Ultra克隆让载体和片段:“一见钟情,5min牵手成功”
来源:    发布时间: 2018-01-25 15:13   76 次浏览   大小:  16px  14px  12px
2017年已结束

2017年已结束

这一年里

你一共有299天来了实验室

你喜欢在下午和晚上做实验

你热衷的实验谜雾重重

你习惯默默做实验 

却很少输出自己的实验成果... ...

 

我的实验日记

2017,

实验记录本里用到的较多的词是“载体构建又失败”、“假阳性”、“没长斑”... ...

 

构建载体没有合适的限制性内切酶,怎么办?

我有4个片段要连接到载体上,一次又一次,杀了我吧?

好不容易连上了,序列连接反了是什么鬼?

构建个载体动辄三四天!啊,让我回家吧!我要回去找妈妈!

 

8月8日大概是很特别的一天

这一天里

我一共在12块板子上面挑了60个菌斑

无一例外,全是假阳性

 

12月24日

这一天我睡得很晚

23时30分还守在电泳槽旁

期待今晚是个平安夜

然而那一晚我的胶图上除了marker什么都没有 

 

这一年

我有150天都在构建载体

在所有的实验中

我对这个实验最专一,可就是不成功

时光中的实验室

是不散的宴席

 

 

我们错过了你的2017,让你走了那么多弯路,

2018,请让诺唯赞无缝克隆试剂陪伴你!

 

诺唯赞最新推出的ClonExpress® Ultra One Step Cloning Kit是新一代的重组克隆试剂盒,可用于单个片段和多个片段的重组连接,不受酶切位点限制。

 

快速   5 - 15 min快速完成重组;

简单   一管式Mix,操作简便;

高效   高效克隆50 bp~10 kb片段,阳性率>95%;

兼容   单片段、多片段、入门克隆三合一;

零背景   提供零背景、Amp+/Kan+双抗性载体。

 

 

  • 引物设计

设计带有同源序列的引物。

CE Design:“我是专门设计引物的软件,看我看我看我 ”

  • PCR扩增插入片段

用设计的带有同源序列的引物扩增插入片段,使得最终的目的产物带有和载体末端同源的序列。

Phanta高保真酶:“我是的保真度是taq酶的53倍,选我选我选我”

  • 线性化载体

选择合适的克隆位点,对载体进行线性化

酶切和PCR:“我们都可以喔,任君挑选喔(✿◡‿◡)”

  • 重组反应5-15 min

按比例混合线性化载体和插入片段

载体和插入片段:“一见钟情,5min牵手成功”

 

  • 转化

将重组产物直接转化后涂平板,挑取克隆进行阳性鉴定

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CE Design:“报告小编,我要给自己加戏,你们知道是引物设计的神嘛,分分钟设计好引物不是梦,一起躁起来。