诺唯赞推出新品,无缝克隆、随心所欲
来源:    发布时间: 2018-01-22 10:43   46 次浏览   大小:  16px  14px  12px
ClonExpress® Ul

ClonExpress® Ultra One Step Cloning Kit

无缝克隆、随心所欲

 

  • 快速:5 - 15min快速重组;
  • 简单:一管式Mix,操作简便;
  • 高效:高效克隆50 bp~10 kb片段,阳性率>95%;
  • 兼容:单片段、多片段、入门克隆三合一;
  • 零背景提供零背景、氨苄/卡那双抗性载体;

 

高度简化的实验流程

通过PCR扩增,使插入片段5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列(15 - 20 bp)。用2×ClonExpress Mix,50℃反应5-15 min,进行重组。重组产物直接转化感受态细胞,平板上会形成数百个单克隆供阳性筛选。

                                                          

                                                                ClonExpress® Ultra单片段同源重组原理图

 

优异的克隆效率

试剂盒能够高效克隆50 bp-10 kb片段,不同长度单片段50 bp、2 kb、4.5 kb、7.5 kb、10 kb;多片段:四个片段(3 kb)、三个片段(10 kb)、五个片段(3 kb)、五个片段(6 kb),纯化后分别与pCE-Zero vector进行同源重组,重组产物转化化学感受态细胞DH5α(Vazyme #C502),菌落数如下图所示。

试剂盒独特的非连接酶依赖体系,无载体自连,克隆阳性率高达95%以上。重组产物转化平板后,各挑取50个单克隆进行菌落PCR鉴定,不同长度插入片段阳性率如下图所示。

 

广泛的体系兼容性

试剂盒兼容1至5个片段同源重组,搭配Vazyme高保真酶,PCR产物可不经过纯化直接进行克隆。重组产物转化化学感受态细胞DH5α(Vazyme #C502),XL10(Vazyme #C503),Fast-T1(Vazyme #C505),得到较高克隆效率。

 

载体序列信息及测序方案

                             

                                  pCE-Zero vector载体,测序时使用通用测序引物(M13)即可。

 

ClonExpress® Ultra One Step Cloning Kit是新一代的重组克隆试剂盒,可快速高效的将1-5个片段定向克隆至任意载体的任意位点,高度优化的2×ClonExpress Mix,50℃反应5-15 min完成重组,操作简单快捷。

 

引物设计:

下载引物设计软件CE Design进行引物设计